ELISA實(shí)驗會(huì )做了，ELISA標準曲線(xiàn)應該怎么繪制呢？有不少客戶(hù)向我們咨詢(xún)，在繪制ELISA試劑盒標準曲線(xiàn)時(shí)應該注意什么？我司就這一問(wèn)題做出以下詳細講解。

一、做標準曲線(xiàn)樣品檢測時(shí)需要注意

1、設置標準曲線(xiàn)樣品的標準濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線(xiàn)濃度范圍之

內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線(xiàn)，盡量要使實(shí)驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線(xiàn)幾乎成直線(xiàn)的范圍內。

2、采用倍比稀釋法配制標準曲線(xiàn)中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會(huì )出現較大的偏離。

3、樣品的濃度等指標是根據標準曲線(xiàn)計算出來(lái)的，所以首先要把做標準曲線(xiàn)看作是比做正式實(shí)驗還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗結果無(wú)從談起。

4、檢測標準樣品時(shí)，應按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。

5、標準曲線(xiàn)的樣品數一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。

6、做出的標準曲線(xiàn)相關(guān)系數因實(shí)驗要求不同而有所變動(dòng)，但一般來(lái)說(shuō)，相關(guān)系數R至少要大于0.98，對于有些實(shí)驗，至少要0.99甚至是0.999。

二、選擇什么方程去擬合

用于免疫檢測的所謂“標準曲線(xiàn)"其實(shí)稱(chēng)為擬合曲線(xiàn)比較合適。免疫檢測時(shí)標準點(diǎn)（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度如果和相應的吸光度

（OD）值如果能夠呈現直線(xiàn)關(guān)系，這時(shí)可以通過(guò)EXELL等方便的獲得擬合曲線(xiàn)，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。但我們做免疫檢測很少有

時(shí)候能夠有這么理想的情況，標品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線(xiàn)關(guān)系，這時(shí)就不能用直線(xiàn)擬合的方式了，而對擬合方法進(jìn)行選擇就是必要的了。

關(guān)于標準曲線(xiàn)的擬合方式，直線(xiàn)、二次曲線(xiàn)、三次曲線(xiàn)、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應中的曲線(xiàn)擬合，但都只適用于曲線(xiàn)的一部分，有的適用于前半段，有的適用于后半段，有的適用于中間一段，而Logistic曲線(xiàn)則對曲線(xiàn)的全部都有較好的適用性。當然，如果用于定量，還是在中間一段較好。這些方法雖然沒(méi)有一種方法可以通用，但也都可以用。關(guān)鍵在于你的標準曲線(xiàn)做到了S形的哪一部分，你想檢測的樣品濃度在曲線(xiàn)的哪一部分。在S曲線(xiàn)的低濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部分可以用直線(xiàn)方程，中間部分可用對數方程，而中后段可用四參數。

目前國際上普遍免疫檢測擬合方式是“四參數邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線(xiàn)關(guān)系，從而進(jìn)一步比較正確的獲得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。

其實(shí)，在一個(gè)長(cháng)的區間內，Logistic應該都能擬合得較為理想。但并不是說(shuō)它就是萬(wàn)能的。事實(shí)上不僅是ELISA，其它很多生物學(xué)反應都是S形曲線(xiàn)，也都可以用Logistic曲線(xiàn)擬合。但建模型是一回事，而用它來(lái)定量是另一回事。如果用來(lái)定量，S形曲線(xiàn)的中間段（較陡處）是比較好的，而兩端的平坦部分計算誤差會(huì )大，有時(shí)甚至會(huì )很大。

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