試劑盒中的稀釋線(xiàn)性及回收率:
a.稀釋線(xiàn)性一般指樣本稀釋線(xiàn)性,是將樣本梯度稀釋下來(lái),看各稀釋梯度濃度是否成線(xiàn)性;參考樣本稀釋線(xiàn)性可以選擇樣本的稀釋倍數。
b.稀釋線(xiàn)性也有做加標稀釋線(xiàn)性的情況,加標稀釋線(xiàn)性是將標準品加入樣本中測定加入的標準品濃度測定是否準確;同樣也是確定待測樣本稀釋倍數的參考指標。一般線(xiàn)性和回收率的范圍在80%-120%比較合適。
c.試劑盒的其它指標:靈敏度:試劑盒能夠檢測到的樣本zui低濃度的能力,如果待檢指標含量很低,需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒。
1、查找待測樣本的蛋白濃度:可以通過(guò)美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的文獻,Universal Protein(uniprot)上給出的蛋白表達量參考值來(lái)比較elisa試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致。
2、試劑盒的應用種屬、檢測樣本的種類(lèi):除試劑盒特別說(shuō)明外,一般不同種屬不能通用。常見(jiàn)待測樣本種類(lèi)有:血清和血漿(不同抗凝劑),細胞上清,和細胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用。
3、試劑盒的檢測范圍:也就是標曲范圍,特別要注意待測樣本濃度是否落在標曲范圍內,對于濃度很高的樣本,可以先進(jìn)行預實(shí)驗摸索到比較好的稀釋倍數后再大量測定樣本。