對制備的McAb進(jìn)行系統的鑒定是十分必要的,應做下述幾個(gè)方面的鑒定:
1.抗體特異性的鑒定
除用免疫原(抗原)進(jìn)行抗體的檢測外,還應該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進(jìn)行交叉試驗,方法可用ELISA、IFA法。例如:
① 制備抗黑色素瘤細胞的McAb,除用黑色素瘤細胞反應外,還應該用其它臟器的腫瘤細胞和正常細胞進(jìn)行交叉反應,以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。
② 制備抗重組的細胞因子的單克隆抗體,應首先考慮是否與表達菌株的蛋白有交叉反應,其次是與其它細胞因子間有無(wú)交叉。
2.McAb的Ig類(lèi)與亞類(lèi)的鑒定
一般在用酶標或熒光素標記的第二抗體進(jìn)行篩選時(shí)已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類(lèi)型。如果用的是酶標或熒光素標記的兔抗鼠IgG或IgM,則檢測出來(lái)的抗體一般是IgG類(lèi)或IgM類(lèi)。至于亞類(lèi)則需要用標準抗亞類(lèi)血清系統作雙擴或夾心ELISA來(lái)確定。在作雙擴試驗時(shí),如加入適量的PEG(3%),更有利于沉淀線(xiàn)的形成。
3.McAb中和活性的鑒定
用動(dòng)物或細胞的保護實(shí)驗來(lái)確定McAb的生物學(xué)活性。例如,如果確定抗病毒McAb的中和活性,則可用抗體和病毒同時(shí)接種于易感的動(dòng)物或敏感的細胞,來(lái)觀(guān)察動(dòng)物或細胞是否得到抗體的保護。
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟:
1、制備抗原。
2、選擇實(shí)驗動(dòng)物。
3、動(dòng)物免疫。
4、試取血進(jìn)行測試,看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫,殺死實(shí)驗動(dòng)物,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體,包括純度以及特異性。