（一）污染清除方法

培養細胞一經(jīng)污染，多數較難處理。如果污染細胞價(jià)值不大，宜棄之；在尋找原因后*消毒操作室，復蘇或重新購置細胞，再培養。  

污染細胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。

1. 細菌和真菌的清除

抗生素對殺滅細菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預防用藥比污染后再用藥效果好。  

預防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規培養液。此法在污染早期有效。

2. 支原體的清除

(1)  用MRA處理

用MRA（Mycoplasma Removal Agent）處理細胞，每4天換一次液,連續處理15天以確保細胞純潔健康，效果好。   

(2)  用清洗純化法清除支原體污染的方法

細胞營(yíng)養馴化→細胞群的篩選→細胞清洗→反復離心洗滌。

其原理是利用離心力、細胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的。由于支原體個(gè)體小且除發(fā)酵支原體外多為細胞外寄生,所以通過(guò)反復洗滌細胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數量降低限.

如結合敏感抗生素的抑殺作用，可達到更好的效果。

(3)  藥物輔助加溫處理

先用藥物處理后，再將污染的組織培養物放在41℃培養18小時(shí)，可殺死支原體，但對細胞有不良影響。

(4)  使用支原體特異性血清  

用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長(cháng)，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。

但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟。   

（二）污染的預防

預防是防止細胞培養過(guò)程中發(fā)生污染的辦法。只有預防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到小程度。  

 一般預防可從以下幾方面著(zhù)手：

1、添加抗生素

2、從物品、用品消毒滅菌著(zhù)手

細胞培養所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無(wú)菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔消毒滅菌。   

3、從操作者做起

(1)  進(jìn)無(wú)菌室前要用肥皂洗手，按規定穿隔離衣。工作開(kāi)始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

(2)  操作者動(dòng)作要輕，必須在火焰周?chē)鸁o(wú)菌區內打開(kāi)瓶口，并將瓶口轉動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要談話(huà)，若打噴嚏或咳嗽應轉向背面。

(3)  操作時(shí)要常更換吸管，一旦發(fā)現吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去。實(shí)驗完畢用消毒水浸泡的紗布擦臺面。

4、防止細胞交叉污染

(1)  在進(jìn)行多種細胞培養操作時(shí)，所用器具要嚴格區分。 

(2)  在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，注射器和滴管不要觸及細胞培養瓶瓶口，以免把細胞帶到培養液中污染其他細胞。   '

(3)  細胞一旦購置或從別處引入，均應及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復蘇培養。

5、無(wú)菌室的*消毒 

(1)  0.1%新潔爾滅全面*擦洗無(wú)菌室；

(2)  甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣休對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。

(3)  細胞培養，首先要避免污染，但在細胞培養過(guò)程中，有了污染用適當的方法清除，這樣也可以保證細胞培養的成功。